霍亂是一種急性腸道傳染病，是我國(guó)法定的甲類(lèi)傳染病，也是《國(guó)境衛(wèi)生檢疫法》規(guī)定的檢疫傳染病之一。自1817年以來(lái)，曾經(jīng)發(fā)生過(guò)七次世界性霍亂大流行，先后導(dǎo)致數(shù)千萬(wàn)人死亡，對(duì)部分染疫地區(qū)的民眾生命健康、經(jīng)濟(jì)發(fā)展、社會(huì)穩(wěn)定等方面造成了毀滅性打擊。每年，全球大約有300萬(wàn)～500萬(wàn)人感染霍亂，死亡人數(shù)達(dá)10~12萬(wàn)。

霍亂弧菌，是引發(fā)霍亂的“幕后黑手”，對(duì)干燥、日光、熱、酸及一般消毒劑均敏感，能引起流行的有O1型和O139型，都可以分泌霍亂腸毒素，引發(fā)各種人體癥狀。

霍亂弧菌是一種烈性傳染病，其致病菌為霍亂弧菌。根據(jù)菌體(O)抗原的不同，霍亂弧菌已被分為200個(gè)以上的O血清群。O1和O139這兩種霍亂弧菌的血清型能夠引起疾病暴發(fā)，非O1非O139霍亂弧菌可引起輕度腹瀉，但不會(huì)造成疾病流行。O1群霍亂弧菌分為稻葉、小川和彥島(少見(jiàn))3種血清型，霍亂在世界范圍內(nèi)已發(fā)生了7次大流行，均由O1群引起，波及100多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，奪去了上千萬(wàn)人的生命。而1992年首次在孟加拉國(guó)確定的O139血清型霍亂是近10年來(lái)肆虐于南亞，并波及亞、歐、美、非、澳五大洲的數(shù)十個(gè)國(guó)家和地區(qū)的一種新發(fā)現(xiàn)的烈性傳染病，目前已成為全球霍亂的優(yōu)勢(shì)菌群。

霍亂以發(fā)病急、傳播快、波及范圍廣為特征，是《國(guó)際衛(wèi)生條例》規(guī)定的國(guó)際檢疫傳染病之一，也是《中華人民共和國(guó)傳染病防治法》規(guī)定的甲類(lèi)傳染病之一。

世界衛(wèi)生組織《預(yù)防和控制霍亂疫情》中提到：如果從任何腹瀉患者的樣本中分離出O1或O139霍亂孤菌，則可確認(rèn)為霍亂病例。1989年至2014年世界各洲發(fā)生霍亂的病例統(tǒng)計(jì)，見(jiàn)圖。

霍亂弧菌，是引發(fā)霍亂的“幕后黑手”，對(duì)干燥、日光、熱、酸及一般消毒劑均敏感，能引起流行的有O1型和O139型，都可以分泌霍亂腸毒素，引發(fā)各種人體癥狀。

各型弧菌產(chǎn)生類(lèi)似的腸毒素，臨床表現(xiàn)也類(lèi)似。每一 次霍亂流行都會(huì)有一個(gè)特定的優(yōu)勢(shì)型，且流行趨勢(shì)是在不斷變化的。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的報(bào)告，2010年至2014年全球霍亂爆發(fā)區(qū)域見(jiàn)圖。

2022年7月9日晚，武昌區(qū)疾控中心接醫(yī)院報(bào)告，武漢大學(xué)出現(xiàn)一例感染性腹瀉病例，以嘔吐腹瀉為主，伴低熱，血清學(xué)凝集試驗(yàn)為O139陽(yáng)性。經(jīng)省市區(qū)三級(jí)疾控中心復(fù)核， 該病例的血清學(xué)凝集試驗(yàn)為 O139 陽(yáng)性，診斷為霍亂，毒力基因陰性。

霍亂流行迅速，且在流行期間發(fā)病率及死亡率均高，危害極大，因此早期迅速和正確的診斷，對(duì)治療和預(yù)防本病的蔓延有重大意義。

我國(guó)《霍亂診斷標(biāo)準(zhǔn)》指出，霍亂的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)要求對(duì)患者的糞便、嘔吐物或肛拭子經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)分離，做霍亂弧菌快速輔助檢測(cè)試驗(yàn)，作為綜合診斷霍亂的依據(jù)之一。

其實(shí)霍亂弧菌檢測(cè)方式有很多，如以化學(xué)法檢測(cè)糞便潛血需要采集前三天避免進(jìn)食紅肉、肝臟及菠菜、甘藍(lán)、花椰菜等食物，以避免造成偽陽(yáng)性結(jié)果。

因等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，限制過(guò)多，為盡早避免陽(yáng)性產(chǎn)生的大范圍傳染情況，采用免疫法檢測(cè)糞便潛血，為最快最直觀的檢測(cè)方法。

目前針對(duì)霍亂弧菌的RDT是一種基于金標(biāo)抗體或熒光標(biāo)記抗體的免疫層析試紙條檢測(cè)技術(shù)，霍亂弧菌快速檢測(cè)卡是利用單克隆抗體膠體金標(biāo)記技術(shù)和膜層析技術(shù)研制而成，用于定性檢測(cè)樣本中可能存在的霍亂弧菌的特異性抗原 O1及O139血清型 。

霍亂弧菌的快速準(zhǔn)確檢測(cè)和區(qū)分群型，對(duì)霍亂流行的檢測(cè)與預(yù)防及制定相應(yīng)的防治對(duì)策意義重大。 Seebio 公司自行研發(fā)的檢測(cè)霍亂的抗體具有極高的靈敏度和特異性，并能夠?qū)Σ煌幕魜y弧菌進(jìn)行精確分型。同時(shí)，各抗體既可單獨(dú)使用，也可聯(lián)合使用，并且可以應(yīng)用在不同檢測(cè)平臺(tái)上。這些特性在科研或者流行病監(jiān)測(cè)當(dāng)中有著不可替代的價(jià)值。Seebio研發(fā)人員從高效價(jià)細(xì)胞株篩選中制備的抗霍亂弧菌單克隆抗體用于免疫層析檢測(cè)試劑盒的開(kāi)發(fā)應(yīng)用。

首先，以滅活的各霍亂弧菌為免疫原對(duì)小鼠進(jìn)行免疫，細(xì)胞融合后,經(jīng)間接ELISA篩選及3次連續(xù)克隆化。得到一系列雜交瘤細(xì)胞。從194株雜交瘤細(xì)胞中選得抗01群小川型霍亂弧菌單克隆抗體的2株雜交瘤細(xì)胞，分別分泌VC O1-OgawamAb1及VC 01-Ogawa mAb2 ;從237株雜交瘤細(xì)胞中選得抗01群霍亂弧菌單克隆抗體的4株雜交瘤細(xì)胞，分別分泌VC O1 mAb1, VC O1 mAb2 , VC O1 mAb3及VC O1mAb4;從286株雜交瘤細(xì)胞中選得抗O139群霍亂弧菌單克隆抗體的2株雜交瘤細(xì)胞,分別分泌VC O139 mAb1及VC0139 mAb2。并對(duì)篩選的細(xì)胞株抗體做配對(duì)驗(yàn)證，特異性、靈敏度檢測(cè)以及滴度鑒定等最終篩選出優(yōu)質(zhì)的抗體對(duì)產(chǎn)品。

Seebio公司目前研發(fā)篩選出的檢測(cè)霍亂弧菌單克隆抗體能夠特異性識(shí)別01-小川型、01-稻葉型和0139群霍亂弧菌,具有特異性好,靈敏度高等特點(diǎn),并且適用于各種免疫平臺(tái)。這些抗體可用于ELISA、Western-blot、金標(biāo)試紙等不同用途的免疫學(xué)檢測(cè)系統(tǒng)的開(kāi)發(fā)。

以間接ELISA檢測(cè)抗體滴度示例。將各滅活的霍亂弧菌菌液以包被液稀釋后包板。封閉后加入倍比稀釋的·各抗霍亂弧菌抗體作為一抗，以包被液為陰性對(duì)照。再加入1:5000稀釋的HRP-羊抗鼠IgG抗體作為二抗，TMB顯色后于波長(zhǎng)450nm測(cè)定OD值。

用包被和偶聯(lián)抗體組裝膠體金測(cè)試卡，將01-小川型、O1-稻葉型、O139群霍亂弧菌滅活菌液倍比稀釋,用膠體金試紙條檢測(cè),評(píng)價(jià)各自的靈敏度。

檢測(cè)結(jié)果如圖所示：

金標(biāo)試紙對(duì)01群小川型霍亂弧菌的檢測(cè)靈敏度達(dá)10⁴cfu/mL,

對(duì)01群稻葉型霍亂弧菌檢測(cè)靈敏度達(dá)10⁵cfu /mL,

對(duì)0139型霍亂弧菌檢測(cè)靈敏度達(dá)10⁴cfu /mL

滅活的測(cè)試菌菌液經(jīng) SDS-PAGE電泳，然后經(jīng)轉(zhuǎn)膜、洗膜等處理后，分別加入VC O1-OgawamAb1 , VC O1-Ogawa mAb2 , VC O139mAb1和VC O139 mAb2做為一抗，最后以HRP標(biāo)記羊抗鼠IgG抗體做二抗進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果如圖所示: