堿性磷酸酶(Alkaline Phosphatase ,AP)是一種膜結(jié)合糖蛋白，分子量約140KDa。AP在自然界中廣泛分布，包括原核生物和更高的真核生物。其活性位點(diǎn)中包括兩個(gè)鋅離子和一個(gè)鎂離子，這三個(gè)位點(diǎn)的金屬離子對于酶活性至關(guān)重要。堿性磷酸酶可以水解各種單磷酸酯，并釋放無機(jī)磷酸鹽。1,2-二氧雜環(huán)丁烷化合物AMPPD作為一種超靈敏的堿性磷酸酶底物，在堿性磷酸酶的催化作用下，磷酸根基團(tuán)水解，形成一個(gè)不穩(wěn)定的中間體，自行分解后四元環(huán)斷裂釋放出大量能量，從而激發(fā)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)。因此磁珠-抗體偶聯(lián)物與堿性磷酸酶-抗體偶聯(lián)物在化學(xué)發(fā)光試劑盒中可作為固相捕獲試劑和酶標(biāo)試劑用于檢測血清中的痕量抗原。與辣根過氧化物酶(HRP)相比，堿性磷酸酶具有穩(wěn)定性和高敏感性的優(yōu)勢。AP在生物學(xué)尤其是分子生物學(xué)和免疫學(xué)領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。

隨著酶促化學(xué)發(fā)光檢測技術(shù)的發(fā)展，酶偶聯(lián)抗體及其偶聯(lián)方法受到廣泛關(guān)注。目前常用的堿性磷酸酶偶聯(lián)方法有過碘酸鈉氧化法、碳二亞胺法和SMCC異性雙功能偶聯(lián)法等。過碘酸鈉氧化法是先將酶進(jìn)行醛基化，然后和抗體偶聯(lián)，這種操作比較復(fù)雜，偶聯(lián)產(chǎn)物有效活性濃度低。碳二亞胺法利用碳二亞胺類物質(zhì)對蛋白質(zhì)進(jìn)行羧基化，這種方法容易形成蛋白分子間的自身聚合，產(chǎn)生非均一性產(chǎn)物。SMCC異性雙功能偶聯(lián)法利用SMCC的異性官能團(tuán)，分別連接堿性磷酸酶和抗體，這種方法相比過碘酸鈉法和碳二亞胺法偶聯(lián)效率高。

西寶生物提供高質(zhì)量的AP原料，性能穩(wěn)定、活性高，精準(zhǔn)助力免疫診斷試劑產(chǎn)品的開發(fā)，受到國內(nèi)外廣大客戶朋友的肯定與支持。

表1  AP酶參數(shù)

a）分別選擇一批次R***AP酶及西寶DCE0108K酶，根據(jù)其標(biāo)識(shí)濃度分別配制成表2的6個(gè)濃度；
b）將配制好的酶結(jié)合物每孔10uL加入包被的發(fā)光板中，每個(gè)濃度3次重復(fù)；
c）向b）中分別加入100uL AMPPD發(fā)光底物，在酶標(biāo)儀上測試發(fā)光值。

當(dāng)AP濃度介于濃度1-濃度6時(shí)，兩者的發(fā)光值均值偏差在±20%范圍內(nèi)，表明西寶AP-01酶與R***AP酶測試性能相當(dāng)。

表2 AP酶活比對（直接測試）

a) 抗體1包被；
b) R***酶及西寶DCE0108K酶分別標(biāo)記抗體2（SMCC偶聯(lián)法）；
c）配置7個(gè)濃度校準(zhǔn)品；
d）加樣，每個(gè)濃度3次重復(fù)，孵育及洗滌；
e）在洗滌完成的板中分別加入100uL AMPPD發(fā)光底物，在酶標(biāo)儀上測試發(fā)光值。

表3 AP酶活比對（標(biāo)記測試）

當(dāng)AP濃度介于校準(zhǔn)品1-校準(zhǔn)品7時(shí)，西寶DCE0108K酶測試發(fā)光值均高于R***AP酶發(fā)光值。這表明，在標(biāo)記抗體時(shí)，西寶DCE0108K酶性能優(yōu)于R酶。

西寶生物堿性磷酸酶的靈敏度、重復(fù)性以及穩(wěn)定性性能優(yōu)越可替代進(jìn)口產(chǎn)品，為體外診斷IVD研發(fā)生產(chǎn)企業(yè)降本賦能。