體外方法的優(yōu)點是可以將功能性抗體片段的克隆、選擇以及陽性抗體編碼基因的分離結(jié)合。可以選擇具有高通量潛能的抗體，并根據(jù)需要精確定制抗體親和力和特異性。噬菌體和酵母展示技術(shù)是常見的展示方法。抗體展示文庫是這一概念較成功的應(yīng)用。
西寶生物目前開發(fā)的噬菌體展示技術(shù)服務(wù)平臺涵蓋了免疫抗體庫、天然抗體庫等常用的文庫類型，可根據(jù)客戶的特殊需求定制個性化文庫，并提供靈活有效的篩選服務(wù)。
噬菌體展示技術(shù)路線
將噬菌體展示文庫作為可溶相，而將與欲選擇的重組基因產(chǎn)物有特異性親和力的靶分子固定在一個固相載體上，洗去不能與固定相特異結(jié)合的文庫的大部分成員，將特異結(jié)合的成員洗脫下來，再進一步擴增，進入下一輪淘選。
全人源抗體庫構(gòu)建流程（圖片來源于網(wǎng)絡(luò)）
常用的噬菌體
溶源性的單鏈絲狀噬菌體(如M13、f1和fd)
服務(wù)內(nèi)容
服務(wù)描述 | 服務(wù)周期 | |
cDNA 合成 | 免疫細胞收集，總RNA提取，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。 | 1周 |
質(zhì)粒構(gòu)建 | 以以上cDNA為模板, PCR擴增抗體基因片段，并連接至載體 (例如：pComb3或pCANTAB5e載體) 。 | 4周 |
轉(zhuǎn)化 | 將已構(gòu)建好的載體電轉(zhuǎn)化至大腸桿菌菌株。 | 1周 |
庫容鑒定 | (1)以上轉(zhuǎn)化菌株復(fù)蘇后，梯度稀釋，并涂布平板，計算陽性克隆數(shù)； (2)挑選10個陽性單克隆，提取質(zhì)粒后，進行酶切驗證; (3)通過陽性克隆數(shù)和酶切驗證的結(jié)果，計算抗體庫庫容。 | |
抗體庫生產(chǎn) | 通過輔助噬菌粒拯救獲得噬菌體展示抗體庫。 | 1周 |
服務(wù)信息
電話: 400-021-8158
