β-半乳糖苷酶是一個四聚體，由四個相同的亞基組成，每個亞基的分子量都為135,000。它是一種含巰基的酶，每個亞基含有19個半胱氨酸殘基。

應用
β-半乳糖苷酶可與特異性識別靶分子的抗體偶聯（酶免疫測定或EISA）。β-半乳糖苷酶也可用作報告酶以監測啟動子的基因表達水平。它可以用作具有抗β-半乳糖苷酶抗體的陽性對照蛋白。

β-半乳糖苷酶可將乳糖切割成單糖成分（葡萄糖和半乳糖）。它還在反饋環中催化葡萄糖轉糖基化為β-半乳糖苷酶的誘導物 - 異乳糖。