產(chǎn)品描述

O-糖蛋白酶是一種高度特異性的蛋白酶，用于切割糖蛋白或糖肽上的肽鍵，該酶特異性識(shí)別粘蛋白型O-連接糖(無論是否唾液酸化)的絲氨酸或蘇氨酸殘基，在其N端進(jìn)行切割。Seebio O糖蛋白酶采用大腸桿菌表達(dá)，可產(chǎn)生適用于質(zhì)譜分析的O-糖肽。該酶含有6X His-Tag,可以方便的在反應(yīng)后去除。

酶活定義 一個(gè)單位是指20uL的反應(yīng)體系中，37°℃反應(yīng)2小時(shí)在20mM Tris-HCl,pH 8.0溶液中，切割超過90%的2uM O-糖肽所需要的酶量。

產(chǎn)品組分

儲(chǔ)存：本品應(yīng)儲(chǔ)存于-20℃，可保存至少12個(gè)月。

運(yùn)輸：干冰運(yùn)輸，活性穩(wěn)定。

產(chǎn)品應(yīng)用

O-糖基化位點(diǎn)測(cè)定

O-糖結(jié)構(gòu)測(cè)定

使用方法(僅供參考)

1) 將10ug糖蛋白與20 mM Tris-HCl pH 8.0,40 mM DTT,0.1%SDS溶液混合，并使得總體積為50ul。

2) 95℃加熱10分鐘。

3) 冷卻至室溫。

4) 加入3ul 500mM碘乙酸溶液。

5) 室溫放置30分鐘，

6) 將溶液轉(zhuǎn)移至超濾離心管中。

7) 12000 ×g離心4分鐘，棄去流穿。

8) 加入400ul 20mM Tris-HCl,pH 8.0溶液。

9) 12000×g離心4分鐘，棄去流穿。加入400ul 20mM Tris-HCl,pH8.0溶液，重復(fù)一次。

10) 加入20ul 20mM Tris-HCl,pH 8.0溶液。

11) 加入1ul O糖蛋白酶，輕柔混勻。

12) 37℃孵育2-18小時(shí)。

13) 12000×g離心4分鐘，收集上清。

注意事項(xiàng)

本品收到后盡量避免反復(fù)凍融；

使用時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套；

本品不得直接用于臨床診斷和治療。