1.項(xiàng)目背景    

胃泌素（Gastrin）是一種主要由胃竇和十二指腸的Ｇ細(xì)胞分泌的胃腸激素，對(duì)調(diào)節(jié)消化道功能和維持其結(jié)構(gòu)完整有重要作用。人體中95％以上有生物活性的胃泌素是α-酰胺化胃泌素，主要含兩種異構(gòu)體G-17和G-34，其中80%~90%是由17個(gè)氨基酸殘基所組成的G-17。G-17僅由胃竇部G細(xì)胞分泌，因此G-17是反映胃黏膜損傷情況的重要指標(biāo)。以G-17作為核心指標(biāo)的人體血清胃功能檢測(cè)，屬于一項(xiàng)無(wú)創(chuàng)、無(wú)痛且安全、經(jīng)濟(jì)的人體胃病檢測(cè)方法。這種檢測(cè)項(xiàng)目可以有效地減少胃癌患病風(fēng)險(xiǎn)，大幅度地提高胃癌疾病的早診以及早治概率，對(duì)于各種胃病的預(yù)防和治療都具有重要的積極意義。

《中國(guó)早期胃癌篩查及內(nèi)鏡診治共識(shí)意見(jiàn)（2014年）》：聯(lián)合檢測(cè)血清G-17、PG I、PG I/PGII比值及Hp抗體，以增加評(píng)估胃黏膜萎縮范圍及程度的準(zhǔn)確性。

《中國(guó)慢性胃炎共識(shí)意見(jiàn)2017年》明確血清胃蛋白酶原（PGI、PGII）以及G-17的檢測(cè)有助于判斷有無(wú)胃黏膜萎縮及其程度。

《中國(guó)早期胃癌篩查指南》（2017年）：胃功能三項(xiàng)檢查結(jié)合內(nèi)鏡精查可以提高對(duì)胃癌的診斷率。

《慢性胃炎基層診療指南（實(shí)踐版2019）》進(jìn)一步明確血清胃蛋白酶原（PGI、PGII）以及G-17檢測(cè)有助于慢性萎縮性胃炎的診斷。PGI、PGI/PGII比值降低，血清G-17水平升高，提示胃體萎縮為主；若PGI及PGI/PGII比值正常，血清G-17水平降低，提示胃竇萎縮為主；全胃萎縮者，PG及G-17均降低。

2. 性能表現(xiàn)    

針對(duì)胃泌素17（G-17）的檢測(cè)，西寶生物推出4種單克隆抗體和1種抗原，適合化學(xué)發(fā)光（AE/AP）和熒光層析平臺(tái)。具體性能如下

（以下評(píng)估僅代表在西寶生物的工藝體系下的驗(yàn)證，建議客戶根據(jù)自身工藝進(jìn)行抗體交叉配對(duì)驗(yàn)證）。

2.1化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)：    

組合1（兩試劑模式）：    

胃泌素17（G-17）抗體（貨號(hào)：EKY0901B）包被羧基磁珠+胃泌素17（G-17）抗體（貨號(hào)：EKY0902B）標(biāo)記吖啶酯；    

線性范圍：0.5pmol/L-500pmol/L；最低檢出限：0.5pmol/L。

濃度值在50000pmol/L以內(nèi)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)高劑量鉤狀效應(yīng)(HOOK效應(yīng))。

   

組合2（三試劑模式）：    

胃泌素17（G-17）抗體（貨號(hào)：EKY0901B）標(biāo)記生物素+胃泌素17（G-17）抗體（貨號(hào)：EKY0902B）標(biāo)記吖啶酯+鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）；    

線性范圍：0.5pmol/L-500pmol/L；最低檢出限：0.5pmol/L。

濃度值在50000pmol/L以內(nèi)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)高劑量鉤狀效應(yīng)(HOOK效應(yīng))。

   

2.2化學(xué)發(fā)光（AP）平臺(tái)：    

組合3（兩試劑模式）：    

胃泌素17（G-17）抗體（貨號(hào)：EKY0901B）包被羧基磁珠+胃泌素17（G-17）抗體（貨號(hào)：EKY0902B）標(biāo)記堿性磷酸酶；    

線性范圍：0.5pmol/L-500pmol/L；最低檢出限：0.5pmol/L。

濃度值在50000pmol/L以內(nèi)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)高劑量鉤狀效應(yīng)(HOOK效應(yīng))。

   

2.3熒光免疫層析平臺(tái)：    

組合4：    

胃泌素17（G-17）抗體（貨號(hào)：EKY0901C）標(biāo)記熒光微球+胃泌素17（G-17）抗體（貨號(hào)：EKY0902C）劃膜；    

線性范圍：0.5pmol/L-100pmol/L；最低檢出限：0.5pmol/L。

濃度值在50000pmol/L以內(nèi)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)高劑量鉤狀效應(yīng)(HOOK效應(yīng))。

   

組合5：    

胃泌素17（G-17）抗體（貨號(hào)：EKY0902C）標(biāo)記熒光微球+胃泌素17（G-17）抗體（貨號(hào)：EKY0901C）劃膜；    

線性范圍：0.5pmol/L-100pmol/L；最低檢出限：0.5pmol/L。

濃度值在50000pmol/L以內(nèi)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)高劑量鉤狀效應(yīng)(HOOK效應(yīng))。

   

2.4 穩(wěn)定性評(píng)估    

2.4.1 吖啶酯標(biāo)記抗體及磁珠包被抗體穩(wěn)定性    

采用胃泌素17（G-17） AE發(fā)光稀釋液（貨號(hào)：DCD0523A）將胃泌素17（G-17）抗體（貨號(hào)：EKY0901B）包被羧基磁珠濃縮液、胃泌素17（G-17）抗體（貨號(hào)：EKY0902B）標(biāo)記吖啶酯濃縮液稀釋成磁珠工作液及吖啶酯工作液，進(jìn)行37℃熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。如表1所示：

a. G-17吖啶酯工作液、磁珠工作液?jiǎn)为?dú)37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均變化在±5%以內(nèi)，表明G-17吖啶酯工作液及磁珠工作液熱穩(wěn)定性良好；

b. G-17吖啶酯工作液+磁珠工作液聯(lián)合37℃熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均變化也在±5%以內(nèi)，表明G-17試劑熱穩(wěn)定性良好。

表1 G-17磁珠及吖啶酯工作液穩(wěn)定性7天數(shù)據(jù)    

2.4.2 堿性磷酸酶標(biāo)記抗體穩(wěn)定性    

A）胃泌素17（G-17）抗體（貨號(hào)：EKY0902B）標(biāo)記堿性磷酸酶濃縮液采用AP酶標(biāo)記物稀釋液（貨號(hào)：DCD0519A）稀釋到合適濃度后，進(jìn)行37℃熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。如表1所示，G-17 ALP酶工作液37℃儲(chǔ)存熱加速3天與2℃-8℃儲(chǔ)存3天發(fā)光值平均降幅超過(guò)30%以上，表明G-17 ALP酶工作液熱穩(wěn)定性差。

表2 G-17 ALP酶工作液熱穩(wěn)定性3天數(shù)據(jù)（不含保護(hù)劑）    

B）在AP酶標(biāo)記物稀釋液（貨號(hào)：DCD0519A）中添加20%左右的蛋白保護(hù)劑GH（貨號(hào)：DCL0009A）配成新的AP酶稀釋液，繼續(xù)進(jìn)行胃泌素17（G-17）抗體（貨號(hào)：EKY0902B）標(biāo)記堿性磷酸酶的37℃熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。如表2所示，G-17 ALP酶工作液37℃儲(chǔ)存熱加速7天與2℃-8℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均降幅在±5%左右，表明G-17 ALP酶工作液熱穩(wěn)定性良好。本實(shí)驗(yàn)表明蛋白保護(hù)劑GH（貨號(hào)：DCL0009A）對(duì)G-17 ALP酶工作液的穩(wěn)定性有很大幫助。

表3 G-17 ALP酶工作液熱穩(wěn)定性7天數(shù)據(jù)（含保護(hù)劑）    

2.4.3 G-17抗原穩(wěn)定性    

采用G-17抗原稀釋液（貨號(hào)：DCD0522A）將G-17抗原（貨號(hào)：EDD0791A）稀釋成7個(gè)梯度（液體型），進(jìn)行37℃熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。如表4所示：

c. G-17抗原稀釋梯度（液體型）2℃-8℃儲(chǔ)存7天與-20℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均降幅在5%以內(nèi)，表明G-17抗原稀釋梯度（液體型）2℃-8℃儲(chǔ)存穩(wěn)定性良好；

d. G-17抗原稀釋梯度（液體型）37℃熱加速7天與-20℃儲(chǔ)存7天發(fā)光值平均降幅超5%以內(nèi)，表明G-17抗原稀釋梯度（液體型）熱穩(wěn)定性良好。

表4 G-17抗原稀釋梯度（液體型）穩(wěn)定性7天數(shù)據(jù)    

3.臨床相關(guān)性    

3.1化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)：    

西寶生物發(fā)光（AE）平臺(tái)G-17抗體配對(duì)組合1（兩試劑模式）與亞輝龍G-17試劑（化學(xué)發(fā)光法）賦值的臨床樣本相關(guān)性R²>0.95，相關(guān)性良好；

   

   

西寶生物發(fā)光（AE）平臺(tái)G-17抗體配對(duì)組合2（三試劑模式）與亞輝龍G-17試劑（化學(xué)發(fā)光法）賦值的臨床樣本相關(guān)性R²>0.95，相關(guān)性良好。

   

   

3.2化學(xué)發(fā)光（AP）平臺(tái)：    

西寶生物發(fā)光（AP）平臺(tái)G-17抗體配對(duì)組合3（兩試劑模式）與亞輝龍G-17試劑（化學(xué)發(fā)光法）賦值的臨床樣本相關(guān)性R²>0.95，相關(guān)性良好；

   

   

3.3熒光免疫層析平臺(tái)：    

西寶生物熒光平臺(tái)G-17抗體配對(duì)組合4與亞輝龍G-17試劑（化學(xué)發(fā)光法）賦值的臨床樣本相關(guān)性R²>0.95，相關(guān)性良好；

   

西寶生物熒光平臺(tái)G-17抗體配對(duì)組合5與亞輝龍G-17試劑（化學(xué)發(fā)光法）賦值的臨床樣本相關(guān)性R²>0.95，相關(guān)性良好；

   

4. 測(cè)試方案    

4.1化學(xué)發(fā)光（AE）平臺(tái)    

4.1.1抗體配對(duì)組合1（兩試劑模式）：    

待測(cè)抗原:胃泌素17(G-17)重組抗原（貨號(hào)：EDD0791A）

樣本/校準(zhǔn)品:樣品加樣量20ul；

試劑1：胃泌素17（G-17）抗體（貨號(hào)：EKY0901B）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測(cè)試；

試劑2：胃泌素17（G-17）抗體（貨號(hào)：EKY0902B）標(biāo)記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測(cè)試；

反應(yīng)條件：

第一步：20ul樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入預(yù)激發(fā)液及激發(fā)液，進(jìn)行測(cè)試。

4.1.2抗體配對(duì)組合2（三試劑模式）：    

待測(cè)抗原:胃泌素17(G-17)重組抗原（貨號(hào)：EDD0791A）

樣本/校準(zhǔn)品:樣品加樣量20ul；

M試劑：鏈酶親和素磁珠（SA）（貨號(hào)：DEG0814A）稀釋物，用量50ul/測(cè)試；

試劑1：胃泌素17（G-17）抗體（貨號(hào)：EKY0901B）標(biāo)記-生物素稀釋物，用量50ul/測(cè)試；

試劑2：胃泌素17（G-17）抗體（貨號(hào)：EKY0902B）標(biāo)記-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測(cè)試；

反應(yīng)條件：

第一步：20ul樣本+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min；

第二步：加入50ul M試劑混合，37℃孵育5min，清洗；

第三步：加入預(yù)激發(fā)液及激發(fā)液，進(jìn)行測(cè)試。

測(cè)試使用發(fā)光儀器:科斯邁SMART 500S。    

4.2 化學(xué)發(fā)光（AP）平臺(tái)    

抗體配對(duì)組合3（兩試劑模式）：    

待測(cè)抗原：胃泌素17(G-17)重組抗原（貨號(hào)：EDD0791A）

樣本/校準(zhǔn)品:樣品加樣量20ul；

試劑1：胃泌素17（G-17）抗體（貨號(hào)：EKY0901B）包被-磁珠稀釋物，用量50ul/測(cè)試；

試劑2：胃泌素17（G-17）抗體（貨號(hào)：EKY0902B）標(biāo)記-堿性磷酸酶稀釋物，用量50ul/測(cè)試；

反應(yīng)條件：

第一步：20ul樣品+50ul試劑1+50ul試劑2混合，37℃孵育10min，清洗；

第二步：加入底物，進(jìn)行測(cè)試。

測(cè)試使用發(fā)光儀器:迎凱Shine i2900。    

4.3 熒光免疫層析平臺(tái)抗體配對(duì)組合4及組合5：    

待測(cè)抗原:胃泌素17(G-17)重組抗原（貨號(hào)：EDD0791A）

反應(yīng)條件：

樣品+稀釋液混勻（本次按照1:2稀釋），上樣，反應(yīng)時(shí)間（10min-15min）；

測(cè)試使用熒光儀器:和邁FIC-S100。    

5.產(chǎn)品信息