艱難梭菌（Clostridium difficile，CD）是一種專(zhuān)性厭氧的革蘭陽(yáng)性桿菌，可存在于正常的腸道菌群中，當(dāng)大量應(yīng)用廣譜抗生素、免疫抑制劑或化療藥物后可導(dǎo)致腸道菌群失調(diào)，艱難梭菌過(guò)度繁殖并分泌毒素進(jìn)而引發(fā)艱難梭菌感染（Clostridium difficile infection，CDI）。CDI主要臨床癥狀為腹瀉、腹痛、發(fā)熱等，嚴(yán)重者可引發(fā)偽膜性腸炎，可伴中毒性巨結(jié)腸、腸穿孔、感染性休克等并發(fā)癥，甚至導(dǎo)致死亡。有研究報(bào)道，臨床上約10-25%的抗生素相關(guān)腹瀉、50-75%的抗菌藥物相關(guān)性結(jié)腸炎和90-100%偽膜性腸炎是由CDI引起的。美國(guó)疾病控制與預(yù)防中心2019年發(fā)布的抗菌藥物耐藥威脅報(bào)告中，將CD列為對(duì)公共衛(wèi)生健康威脅級(jí)別最高的“極危（Urgent）”等級(jí)，警示級(jí)別高于被列入“嚴(yán)重（Serious）”等超級(jí)細(xì)菌如耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌（MRSA）、產(chǎn)ESBLs腸桿菌目細(xì)菌等。此外CD菌株分為產(chǎn)毒株和非產(chǎn)毒株，產(chǎn)毒株主要產(chǎn)A（腸毒素）、B（細(xì)胞毒素）兩種毒素。由高產(chǎn)毒株引起的CD相關(guān)性腹瀉在兒童人群中具有較好的復(fù)發(fā)率和死亡率，且在較多國(guó)家和地區(qū)引起院內(nèi)爆發(fā)流行。

2017年我國(guó)發(fā)布了《中國(guó)成人艱難梭菌感染診斷和治療專(zhuān)家共識(shí)》，將CDI診斷標(biāo)準(zhǔn)更新為： 患者出現(xiàn)中至重度腹瀉或腸梗阻，并滿足以下任一條件：

（1）糞便檢測(cè)CD毒素或產(chǎn)毒型CD結(jié)果陽(yáng)性；

（2）內(nèi)鏡下或組織病理檢查顯示偽膜性腸炎。

艱難梭菌的檢測(cè)包括：菌株檢測(cè)、毒性檢測(cè)、毒素的核酸檢測(cè)。

通常使用酶免疫方法直接檢測(cè)糞便標(biāo)本中的GDH抗原，具有快速，價(jià)格低廉且陰性預(yù)測(cè)值高等優(yōu)點(diǎn)，適合進(jìn)行CDI初篩試驗(yàn)，我國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室通過(guò)原核表達(dá)GDH，建立GDH膠體金免疫層析檢測(cè)法，成功研制出膠體金試紙，可以快速、準(zhǔn)確、方便地診斷CDI。GDH檢測(cè)結(jié)果陰性即可排除CDI，但由于GDH是CD菌株表面的一種共同抗原，陽(yáng)性結(jié)果還需經(jīng)過(guò)毒素檢測(cè)進(jìn)一步確認(rèn)是否為產(chǎn)毒型菌株。

目前國(guó)內(nèi)外最常用的毒素免疫檢測(cè)方法包括酶免疫分析（Enzyme immunoassay，EIA）與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法（Enzyme linked immunosorbent assay，EIASA）。這兩種方法通過(guò)抗原-抗體反應(yīng)直接檢測(cè)腹瀉糞便標(biāo)本中的tcdA/B，具有特異性高，可以區(qū)分出產(chǎn)毒型與非產(chǎn)毒型菌株等優(yōu)勢(shì)，操作簡(jiǎn)便，可在數(shù)分鐘至1小時(shí)內(nèi)即可得出檢測(cè)結(jié)果。 腹瀉樣本無(wú)須培養(yǎng)，可直接采用試劑盒對(duì)樣本中的谷氨酸脫氫酶（GDH）抗原和毒素A/B同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，如果二者結(jié)果不一致，需結(jié)合PCR檢測(cè)tcdB基因，判斷樣本中有無(wú)產(chǎn)毒艱難梭菌。結(jié)果判讀：

a）GDH+/毒素+：樣本中存在產(chǎn)毒艱難梭菌；

b）GDH+/毒素-：PCR檢測(cè)tcdB基因，tcdB+則樣本中存在產(chǎn)毒艱難梭菌，tcdB-則樣本中無(wú)產(chǎn)毒艱難梭菌；

c）GDH-/毒素+：PCR檢測(cè)tcdB基因，tcdB+則樣本中存在產(chǎn)毒艱難梭菌，tcdB-則樣本中無(wú)產(chǎn)毒艱難梭菌；

d）GDH-/毒素-：樣本中無(wú)艱難梭菌。

核酸分子診斷目前在臨床微生物診斷領(lǐng)域已被廣泛使用，具有特異性好、靈敏度高、檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定等特點(diǎn)。近年來(lái)，通過(guò)核酸擴(kuò)增技術(shù)（Nucleic acid amplification test，NAAT）診斷CDI病例的方法也備受青睞，多項(xiàng)研究結(jié)果表明NAATs不但提高了靈敏度而且縮短了檢測(cè)周期。

西寶生物作為體外診斷試劑原料上游供應(yīng)商，目前研發(fā)篩選出艱難梭菌免疫學(xué)檢測(cè)的單克隆抗體能夠特異性識(shí)別谷氨酸脫氫酶（GDH）、毒素A（tcdA）和毒素B（tcdB），tcdA與tcdB分別為腸毒素與細(xì)胞毒素。西寶生物研發(fā)團(tuán)隊(duì)通過(guò)數(shù)10株以上抗體精心篩選出配對(duì)抗體，經(jīng)過(guò)多家客戶(hù)驗(yàn)證，可以用于膠體金、乳膠等免疫層析診斷試劑的生產(chǎn)。靈敏度約為1ng/ml，可替代進(jìn)口原料。