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有木有增加蛋白表達(dá)量的轉(zhuǎn)染試劑？ ——試試Seebio?小西家的陽離子聚合物PEI

  專題推薦     |      2023-08-01
CHO細(xì)胞和HEK-293細(xì)胞常用于哺乳動(dòng)物瞬轉(zhuǎn)系統(tǒng)中快速生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的蛋白。然而，研究者在利用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染生產(chǎn)重組蛋白時(shí)，通常會(huì)遇到蛋白表達(dá)量極低，成本高昂且操作復(fù)雜不利于放大生產(chǎn)等問題。優(yōu)質(zhì)的轉(zhuǎn)染試劑是通往優(yōu)質(zhì)蛋白生產(chǎn)瞬轉(zhuǎn)平臺(tái)的必經(jīng)之路。
自1996年開始陽離子聚合物作為基因轉(zhuǎn)染載體的研究，聚乙烯亞胺（Polyethylenimine，PEI）作為化學(xué)轉(zhuǎn)染的新寵，近年來倍受關(guān)注，無論是科研還是在工業(yè)化、大規(guī)模瞬時(shí)轉(zhuǎn)染表達(dá)重組蛋白或病毒載體領(lǐng)域都是使用廣泛的轉(zhuǎn)染試劑。西寶生物開發(fā)的新一代陽離子聚合物產(chǎn)品著重優(yōu)化和DNA結(jié)合能力。為了更好的了解PEI這款陽離子聚合物產(chǎn)品，本文從PEI的分類，原理，使用及常見問題及產(chǎn)品推薦幾個(gè)方面介紹該產(chǎn)品。
PEI的分類
PEI的結(jié)構(gòu)可以寫成是-(CH2CH2NH)n-。根據(jù)合成原料與工藝的差異，產(chǎn)物有支鏈PEI與直鏈PEI的差異，2者在應(yīng)用上存在比較明顯的偏好。支鏈PEI在力學(xué)性、加工性、成膜性、薄膜透光性方面更具有優(yōu)勢(shì)，廣泛應(yīng)用于造紙、石油、輕紡、建筑等領(lǐng)域，而直鏈PEI在真核細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)染方面更具有優(yōu)勢(shì)，已廣泛應(yīng)用于基因轉(zhuǎn)染方面。
直鏈PEI，應(yīng)用較廣泛的主要有PEI25000與PEI40000（也有稱PEIMAX），在HEK293和CHO等細(xì)胞中轉(zhuǎn)染效率較高。PEI 40000與PEI 25000轉(zhuǎn)染試劑相比，具有很多優(yōu)點(diǎn)。包括：
1.溶解性：PEI 40000較易溶解，可直接在水中溶解，PEI 25000需要先把水調(diào)成弱酸性助其溶解，溶解后再用NaOH把pH調(diào)至中性；
2.操作性：PEI 40000操作簡(jiǎn)便，更易于使用，且比PEI 25000的轉(zhuǎn)染效果好；
3.穩(wěn)定性：PEI 25000含有4-11%的丙酰基殘留，其能阻止聚合物主鏈與DNA結(jié)合。相較于PEI 25000，PEI 40000是完全脫落的結(jié)構(gòu)，因此其性能始終高效如一。
PEI轉(zhuǎn)染的原理
陽離子聚合物轉(zhuǎn)染的共同原理：聚合物把DNA包裹形成復(fù)合物，防止被DNase降解，然后附著在細(xì)胞膜上被內(nèi)吞進(jìn)入胞內(nèi)，破裂釋放后，DNA進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)中，從而發(fā)揮一定的功能。陽離子聚合物和陽離子脂質(zhì)體的主要區(qū)別在于其不含疏水部分而完全溶于水，并可以方便地進(jìn)行化學(xué)修飾。
直鏈PEI單體中每3個(gè)原子含1個(gè)氮，形成胺基。每相隔二個(gè)碳原子，即每第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在pH下都能充當(dāng)有效的質(zhì)子海綿(proton sponge)體。這是PEI有較強(qiáng)的結(jié)合DNA和黏附細(xì)胞，能作為基因轉(zhuǎn)導(dǎo)載體的重要原因。針對(duì)這個(gè)特點(diǎn)西寶生物開發(fā)的新一代陽離子聚合物產(chǎn)品著重優(yōu)化和DNA結(jié)合能力。
pH值與質(zhì)子化關(guān)系
圖1. pH值與質(zhì)子化關(guān)系（源自：doi.org/10.1021/acs.macromol.0c01501）
PEI 能將 DNA 包裹成帶正電荷的微粒，這些微?？梢责ず系綆в胸?fù)電荷的細(xì)胞表面殘基，并通過胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞。一旦進(jìn)入細(xì)胞，胺的質(zhì)子化導(dǎo)致反離子大量涌入以及滲透勢(shì)降低，在低pH環(huán)境中實(shí)現(xiàn)DNA胞內(nèi)釋放。普遍被接受的觀點(diǎn)是PEI上未質(zhì)子化的胺可以在與膜結(jié)合的細(xì)胞器（如溶酶體）中吸收氫離子，這將導(dǎo)致更多氫離子的流入，誘發(fā)滲透溶脹。而質(zhì)子化胺之間的排斥引起PEI構(gòu)象的改變，上述變化導(dǎo)致的滲透膨脹使囊泡釋放聚合物與 DNA 形成的復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)。復(fù)合物拆解后，DNA 能自由的融合到細(xì)胞核中。
PEI轉(zhuǎn)染原理
圖2. PEI轉(zhuǎn)染原理 (選自Current Protocols in Chemical Biology 9:147–157, September 2017)
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
1.轉(zhuǎn)染效率高：適合轉(zhuǎn)染DNA，細(xì)胞密度在70%~80%時(shí)，轉(zhuǎn)染效率可以達(dá)到80%以上；
2.應(yīng)用范圍廣：既適用于HEK293等真核貼壁細(xì)胞的轉(zhuǎn)染 也適用于懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染，并且適用于有血清和無血清的轉(zhuǎn)染條件。
3.蛋白表達(dá)量高： 少量的轉(zhuǎn)染試劑獲得高產(chǎn)量的蛋白表達(dá)，性價(jià)比高，適用于大規(guī)模的轉(zhuǎn)染。
4.無機(jī)試劑，無動(dòng)物源成分
5.低毒性：轉(zhuǎn)染細(xì)胞形態(tài)良好并表達(dá)大量的目的蛋白；
6.產(chǎn)品穩(wěn)定，質(zhì)控嚴(yán)格；
不同細(xì)胞系參考數(shù)據(jù) 以48孔板為例（數(shù)據(jù)僅供參考）
細(xì)胞類型
培養(yǎng)體系
轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度
DNA
Seebio PEI（1mg/mL）
293H
DMEM
70-80%
0.2ug
0.2uL
293FT
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
293E
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
293F
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
COS7
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
hela
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
CaCO2
MEM
70-80%
0.2ug
0.9uL
BHK21
MEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
RAW264.7
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
SW480
IMDM
70-80%
0.2ug
0.6uL
MDCK
DMEM
70-80%
0.2ug
1uL
CHO-K1
IMDM
70-80%
0.2ug
1uL
HepG2
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
A549
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
NIH/3T3
DMEM
70-80%
0.2ug
0.9uL
Vero
DMEM
70-80%
0.2ug
0.9uL
sf9
SIM SF
70-80%
0.2ug
0.9uL
不同培養(yǎng)體系參考值
培養(yǎng)皿
表面積(cm2)
培養(yǎng)基總量
DNA的量(ug)
轉(zhuǎn)染試劑的量(uL)
稀釋液體積(uL)
96孔板
0.3
100uL
0.1
0.3
10
48孔板
0.7
200uL
0.2
0.6
20
24孔板
1.9
500uL
0.5
1.5
50
12孔板
3.8
1mL
1
3
100
6孔板
10
2 mL
2
6
200
25cm2培養(yǎng)瓶
21
4 mL
4
12
400
75cm2培養(yǎng)瓶
58
10 mL
10
30
1000
轉(zhuǎn)染中的常見問題
1.轉(zhuǎn)染效率低
原因：(1)細(xì)胞活力：使用活力好傳代小于15代的細(xì)胞。
(2)細(xì)胞接種密度高/低：適當(dāng)降低/增加接種密度。
(3)PEI/DNA比率不合適：進(jìn)行不同基因轉(zhuǎn)染時(shí)應(yīng)對(duì)PEI和DNA的比例進(jìn)行優(yōu)化，以達(dá)到合適比例。
(4)質(zhì)粒片段較大：可根據(jù)實(shí)際實(shí)驗(yàn)需要調(diào)整，如適當(dāng)增加轉(zhuǎn)染質(zhì)?？偭康取?/div>
(5)混合方式不當(dāng)：質(zhì)粒DNA和PEI溶液混合時(shí)避免渦旋。同時(shí)要注意PEI加入 DNA溶液中的順序。
2.細(xì)胞毒性高
原因：(1)轉(zhuǎn)染液孵育時(shí)間過長(zhǎng)：過長(zhǎng)時(shí)間 PEI/DNA 復(fù)合體會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞毒性。
(2)細(xì)胞接種密度低：適當(dāng)增加接種密度。
(3)PEI/DNA比例高：優(yōu)化合適的PEI和DNA的比例。
3.轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定，重復(fù)性不好
原因： 轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定一般與兩個(gè)因素緊密相關(guān)，一個(gè)是轉(zhuǎn)染試劑的穩(wěn)定性，另一個(gè)是基因的穩(wěn)定性。轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)按照說明書建議的保存溫度及條件進(jìn)行保存。溶解后則不建議反復(fù)凍融。如短時(shí)間內(nèi)連續(xù)使用，可放置于4℃保存。若超過10天不使用，不建議使用。
產(chǎn)品選擇指南
目前西寶生物（Seebio）提供了多種形式的轉(zhuǎn)染試劑，客戶可根據(jù)轉(zhuǎn)染核酸的種類/貼壁細(xì)胞/懸浮細(xì)胞等條件，選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑。具體選擇指南如下：
產(chǎn)品種類
核酸類型
細(xì)胞類型
是否可替換
Seebio?聚乙烯亞胺PEI（Polyethylenimine）轉(zhuǎn)染試劑 (貨號(hào)：AJL0940C)
DNA
貼壁細(xì)胞
懸浮細(xì)胞
可替換lipo3000，jet PEI
線性PEI轉(zhuǎn)染試MW25000(貨號(hào)：AJL0115C)
DNA
貼壁細(xì)胞
懸浮細(xì)胞
可替換PEI 25KTM(23966)
線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(速溶型)MW40000(貨號(hào)：AJL0940B)
DNA
貼壁細(xì)胞
懸浮細(xì)胞
可替換PEI MAX 40K(24765)
訂購信息
即用型
品牌
貨號(hào)
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
Seebio
Seebio?聚乙烯亞胺PEI（Polyethylenimine）轉(zhuǎn)染試劑
1ml
10ml
50ml
100ml
粉末非即用型
Seebio
Seebio?線性聚乙烯亞胺，MW40000
10mg
100mg
1g
Seebio
Seebio?線性聚乙烯亞胺， MW25000
1g
相關(guān)產(chǎn)品
平衡鹽及抗生素
品牌
貨號(hào)
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
Seebio
Hanks平衡鹽粉劑(1×HBSS,含酚紅)
1L
Seebio
PBS緩沖液
500ml
WAKO
293-72601
D-PBS(-),Powder
1L×10
299-72603
10L
WAKO
Penicillin-Streptomycin Solution（×100）
青霉素-鏈霉素溶液（×100）
100mL
WAKO
Penicillin-Streptomycin Solution（×50）
青霉素-鏈霉素溶液（×50）
100mL
Seebio 293細(xì)胞專用培養(yǎng)基
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
產(chǎn)品說明
規(guī)格
SeeHEK293CD01基礎(chǔ)培養(yǎng)基(液體)
(無動(dòng)物源，化學(xué)成分限定,不含水解物，含微量生長(zhǎng)因子)
1L
SeeHEK293CD01基礎(chǔ)培養(yǎng)基(干粉)
(無動(dòng)物源，化學(xué)成分限定,不含水解物，含微量生長(zhǎng)因子)
10L
100L
SeeHEK293CD02基礎(chǔ)培養(yǎng)基(液體)
(無動(dòng)物源，化學(xué)成分限定,不含水解物和生長(zhǎng)因子)
1L
SeeHEK293CD02基礎(chǔ)培養(yǎng)基(干粉)
(無動(dòng)物源，化學(xué)成分限定,不含水解物和生長(zhǎng)因子)
10L
100L
SeeHEK293CD03基礎(chǔ)培養(yǎng)基(液體)
原始培養(yǎng)基已經(jīng)含有4mM Gln
1L
SeeHEK293CD03,基礎(chǔ)培養(yǎng)基(干粉)
原始培養(yǎng)基已經(jīng)含有4mM Gln
10L
100L
SeeHEK293FM01補(bǔ)料培養(yǎng)基(液體)
液體補(bǔ)料A含有60g/L的葡萄糖，補(bǔ)料B不含葡萄糖
1L+100ml
SeeHEK293FM01補(bǔ)料培養(yǎng)基(干粉)
液體補(bǔ)料A含有60g/L的葡萄糖，補(bǔ)料B不含葡萄糖
10L+1L
100L+10L
Seebio?條件培養(yǎng)液(293T)
含有細(xì)胞分泌物的培養(yǎng)液
10ml
250ml
WAKO BalanCD 無血清細(xì)胞培養(yǎng)基
  1. cGMP級(jí)別
  2. 可以提供液體及粉末形式
  3. 無血清
  4. 已取得DMF
  5. 化學(xué)成分限定
  6. 適應(yīng)小試劑放大
HEK293系列：基因治療病毒載體生產(chǎn)，蛋白瞬時(shí)表達(dá) - 重組蛋白生產(chǎn)
貨號(hào)
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
91165-1L
BalanCD HEK293
BalanCD HEK293培養(yǎng)基
1L
94137-10L
10L
94137-100L
100L
91166-500ML
BalanCD HEK293 Feed
BalanCD HEK293補(bǔ)料
500mL
981444-10L
10L
981444-100L
100L
防止細(xì)胞結(jié)團(tuán)
品牌
貨號(hào)
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
WAKO

Sodium Dextran Sulfate 5,000
葡聚糖硫酸鈉鹽5,000（生化級(jí)）

25g
WAKO
100g
WAKO
500g
WAKO

Sodium Dextran Sulfate 5,000
葡聚糖硫酸鈉鹽5,000（分子級(jí)）

25g
WAKO
100g
WAKO
500g
消泡劑
品牌
貨號(hào)
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
WAKO

Antifoam SI
消泡劑 SI

100ml
WAKO
500ml
WAKO

Antifoam PE-H
消泡劑 PE-H (參考)在20℃時(shí)，粘度約983cP

100ml
WAKO
500ml
WAKO

Antifoam PE-M
消泡劑 PE-M (參考)在20℃時(shí)，粘度約325cP

100ml
WAKO
500ml
WAKO

Antifoam PE-L
消泡劑 PE-L (參考)在20℃時(shí)，粘度約160cP

100ml
WAKO
500ml
細(xì)胞解離
品牌
貨號(hào)
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
WAKO
203-20251

Trypsin-EDTA Solution without Phenol Red, AF
胰蛋白酶EDTA溶液（無酚紅）

100ml
WAKO
207-20271

Trypsin-EDTA Solution (High Trypsin) without Phenol Red, AF
胰蛋白酶EDTA溶液（無酚紅）

100ml
WAKO細(xì)胞凍存
BAMBANKER 無血清細(xì)胞凍存液 用戶文獻(xiàn)眾多
產(chǎn)品編號(hào)
英文名稱
應(yīng)用
規(guī)格
302-14686
BAMBANKER'
常規(guī)工具細(xì)胞，干細(xì)胞，PBMCs,免疫細(xì)胞，類器官等
100mL
306-14684
20mL×5
PRIME-XV 無DMSO 凍存液 無動(dòng)物源成分，化學(xué)成分限定，已取得美國FDA DMF
產(chǎn)品編號(hào)
英文名稱
應(yīng)用
規(guī)格
91140-10ml
PRIME-XVFreezISDMSO free
干細(xì)胞
10mL
91140-100ml
100mL
iStock 無血清細(xì)胞凍存液 無異源，已取得日本《再生醫(yī)療等制品材料適格性確認(rèn)書》
產(chǎn)品編號(hào)
英文名稱
應(yīng)用
規(guī)格
385-19451
iStockXeno-Free Freezing medium
人免疫細(xì)胞，PBMCs,MSCs,iPS等
120mL

 

CHO細(xì)胞和HEK-293細(xì)胞常用于哺乳動(dòng)物瞬轉(zhuǎn)系統(tǒng)中快速生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的蛋白。然而，研究者在利用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染生產(chǎn)重組蛋白時(shí)，通常會(huì)遇到蛋白表達(dá)量極低，成本高昂且操作復(fù)雜不利于放大生產(chǎn)等問題。優(yōu)質(zhì)的轉(zhuǎn)染試劑是通往優(yōu)質(zhì)蛋白生產(chǎn)瞬轉(zhuǎn)平臺(tái)的必經(jīng)之路。
自1996年開始陽離子聚合物作為基因轉(zhuǎn)染載體的研究，聚乙烯亞胺（Polyethylenimine，PEI）作為化學(xué)轉(zhuǎn)染的新寵，近年來倍受關(guān)注，無論是科研還是在工業(yè)化、大規(guī)模瞬時(shí)轉(zhuǎn)染表達(dá)重組蛋白或病毒載體領(lǐng)域都是使用廣泛的轉(zhuǎn)染試劑。西寶生物開發(fā)的新一代陽離子聚合物產(chǎn)品著重優(yōu)化和DNA結(jié)合能力。為了更好的了解PEI這款陽離子聚合物產(chǎn)品，本文從PEI的分類，原理，使用及常見問題及產(chǎn)品推薦幾個(gè)方面介紹該產(chǎn)品。
PEI的分類
PEI的結(jié)構(gòu)可以寫成是-(CH2CH2NH)n-。根據(jù)合成原料與工藝的差異，產(chǎn)物有支鏈PEI與直鏈PEI的差異，2者在應(yīng)用上存在比較明顯的偏好。支鏈PEI在力學(xué)性、加工性、成膜性、薄膜透光性方面更具有優(yōu)勢(shì)，廣泛應(yīng)用于造紙、石油、輕紡、建筑等領(lǐng)域，而直鏈PEI在真核細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)染方面更具有優(yōu)勢(shì)，已廣泛應(yīng)用于基因轉(zhuǎn)染方面。
直鏈PEI，應(yīng)用較廣泛的主要有PEI25000與PEI40000（也有稱PEIMAX），在HEK293和CHO等細(xì)胞中轉(zhuǎn)染效率較高。PEI 40000與PEI 25000轉(zhuǎn)染試劑相比，具有很多優(yōu)點(diǎn)。包括：
1.溶解性：PEI 40000較易溶解，可直接在水中溶解，PEI 25000需要先把水調(diào)成弱酸性助其溶解，溶解后再用NaOH把pH調(diào)至中性；
2.操作性：PEI 40000操作簡(jiǎn)便，更易于使用，且比PEI 25000的轉(zhuǎn)染效果好；
3.穩(wěn)定性：PEI 25000含有4-11%的丙酰基殘留，其能阻止聚合物主鏈與DNA結(jié)合。相較于PEI 25000，PEI 40000是完全脫落的結(jié)構(gòu)，因此其性能始終高效如一。
PEI轉(zhuǎn)染的原理
陽離子聚合物轉(zhuǎn)染的共同原理：聚合物把DNA包裹形成復(fù)合物，防止被DNase降解，然后附著在細(xì)胞膜上被內(nèi)吞進(jìn)入胞內(nèi)，破裂釋放后，DNA進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)中，從而發(fā)揮一定的功能。陽離子聚合物和陽離子脂質(zhì)體的主要區(qū)別在于其不含疏水部分而完全溶于水，并可以方便地進(jìn)行化學(xué)修飾。
直鏈PEI單體中每3個(gè)原子含1個(gè)氮，形成胺基。每相隔二個(gè)碳原子，即每第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在pH下都能充當(dāng)有效的質(zhì)子海綿(proton sponge)體。這是PEI有較強(qiáng)的結(jié)合DNA和黏附細(xì)胞，能作為基因轉(zhuǎn)導(dǎo)載體的重要原因。針對(duì)這個(gè)特點(diǎn)西寶生物開發(fā)的新一代陽離子聚合物產(chǎn)品著重優(yōu)化和DNA結(jié)合能力。
pH值與質(zhì)子化關(guān)系
圖1. pH值與質(zhì)子化關(guān)系（源自：doi.org/10.1021/acs.macromol.0c01501）
PEI 能將 DNA 包裹成帶正電荷的微粒，這些微?？梢责ず系綆в胸?fù)電荷的細(xì)胞表面殘基，并通過胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞。一旦進(jìn)入細(xì)胞，胺的質(zhì)子化導(dǎo)致反離子大量涌入以及滲透勢(shì)降低，在低pH環(huán)境中實(shí)現(xiàn)DNA胞內(nèi)釋放。普遍被接受的觀點(diǎn)是PEI上未質(zhì)子化的胺可以在與膜結(jié)合的細(xì)胞器（如溶酶體）中吸收氫離子，這將導(dǎo)致更多氫離子的流入，誘發(fā)滲透溶脹。而質(zhì)子化胺之間的排斥引起PEI構(gòu)象的改變，上述變化導(dǎo)致的滲透膨脹使囊泡釋放聚合物與 DNA 形成的復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)。復(fù)合物拆解后，DNA 能自由的融合到細(xì)胞核中。
PEI轉(zhuǎn)染原理
圖2. PEI轉(zhuǎn)染原理（選自Current Protocols in Chemical Biology 9:147–157, September 2017）
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
1.轉(zhuǎn)染效率高：適合轉(zhuǎn)染DNA，細(xì)胞密度在70%~80%時(shí)，轉(zhuǎn)染效率可以達(dá)到80%以上；
2.應(yīng)用范圍廣：既適用于HEK293等真核貼壁細(xì)胞的轉(zhuǎn)染 也適用于懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染，并且適用于有血清和無血清的轉(zhuǎn)染條件。
3.蛋白表達(dá)量高： 少量的轉(zhuǎn)染試劑獲得高產(chǎn)量的蛋白表達(dá)，性價(jià)比高，適用于大規(guī)模的轉(zhuǎn)染。
4.無機(jī)試劑，無動(dòng)物源成分
5.低毒性：轉(zhuǎn)染細(xì)胞形態(tài)良好并表達(dá)大量的目的蛋白；
6.產(chǎn)品穩(wěn)定，質(zhì)控嚴(yán)格；
不同細(xì)胞系參考數(shù)據(jù) 以48孔板為例（數(shù)據(jù)僅供參考）
細(xì)胞類型
培養(yǎng)體系
轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度
DNA
Seebio PEI（1mg/mL）
293H
DMEM
70-80%
0.2ug
0.2uL
293FT
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
293E
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
293F
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
COS7
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
hela
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
CaCO2
MEM
70-80%
0.2ug
0.9uL
BHK21
MEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
RAW264.7
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
SW480
IMDM
70-80%
0.2ug
0.6uL
MDCK
DMEM
70-80%
0.2ug
1uL
CHO-K1
IMDM
70-80%
0.2ug
1uL
HepG2
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
A549
DMEM
70-80%
0.2ug
0.6uL
NIH/3T3
DMEM
70-80%
0.2ug
0.9uL
Vero
DMEM
70-80%
0.2ug
0.9uL
sf9
SIM SF
70-80%
0.2ug
0.9uL
不同培養(yǎng)體系參考值
培養(yǎng)皿
表面積(cm2)
培養(yǎng)基總量
DNA的量(ug)
轉(zhuǎn)染試劑的量(uL)
稀釋液體積(uL)
96孔板
0.3
100uL
0.1
0.3
10
48孔板
0.7
200uL
0.2
0.6
20
24孔板
1.9
500uL
0.5
1.5
50
12孔板
3.8
1mL
1
3
100
6孔板
10
2 mL
2
6
200
25cm2培養(yǎng)瓶
21
4 mL
4
12
400
75cm2培養(yǎng)瓶
58
10 mL
10
30
1000
轉(zhuǎn)染中的常見問題
1.轉(zhuǎn)染效率低
原因：(1)細(xì)胞活力：使用活力好傳代小于15代的細(xì)胞。
(2)細(xì)胞接種密度高/低：適當(dāng)降低/增加接種密度。
(3)PEI/DNA比率不合適：進(jìn)行不同基因轉(zhuǎn)染時(shí)應(yīng)對(duì)PEI和DNA的比例進(jìn)行優(yōu)化，以達(dá)到合適比例。
(4)質(zhì)粒片段較大：可根據(jù)實(shí)際實(shí)驗(yàn)需要調(diào)整，如適當(dāng)增加轉(zhuǎn)染質(zhì)?？偭康?。
(5)混合方式不當(dāng)：質(zhì)粒DNA和PEI溶液混合時(shí)避免渦旋。同時(shí)要注意PEI加入 DNA溶液中的順序。
2.細(xì)胞毒性高
原因：(1)轉(zhuǎn)染液孵育時(shí)間過長(zhǎng)：過長(zhǎng)時(shí)間 PEI/DNA 復(fù)合體會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞毒性。
(2)細(xì)胞接種密度低：適當(dāng)增加接種密度。
(3)PEI/DNA比例高：優(yōu)化合適的PEI和DNA的比例。
3.轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定，重復(fù)性不好
原因： 轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定一般與兩個(gè)因素緊密相關(guān)，一個(gè)是轉(zhuǎn)染試劑的穩(wěn)定性，另一個(gè)是基因的穩(wěn)定性。轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)按照說明書建議的保存溫度及條件進(jìn)行保存。溶解后則不建議反復(fù)凍融。如短時(shí)間內(nèi)連續(xù)使用，可放置于4℃保存。若超過10天不使用，不建議使用。
產(chǎn)品選擇指南
目前西寶生物（Seebio）提供了多種形式的轉(zhuǎn)染試劑，客戶可根據(jù)轉(zhuǎn)染核酸的種類/貼壁細(xì)胞/懸浮細(xì)胞等條件，選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑。具體選擇指南如下：
產(chǎn)品種類
核酸類型
細(xì)胞類型
是否可替換
Seebio?聚乙烯亞胺PEI（Polyethylenimine）轉(zhuǎn)染試劑 (貨號(hào)：AJL0940C)
DNA
貼壁細(xì)胞
懸浮細(xì)胞
可替換lipo3000，jet PEI
線性PEI轉(zhuǎn)染試MW25000(貨號(hào)：AJL0115C)
DNA
貼壁細(xì)胞
懸浮細(xì)胞
可替換PEI 25KTM(23966)
線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(速溶型)MW40000(貨號(hào)：AJL0940B)
DNA
貼壁細(xì)胞
懸浮細(xì)胞
可替換PEI MAX 40K(24765)
訂購信息
即用型
品牌
貨號(hào)
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
Seebio
Seebio?聚乙烯亞胺PEI（Polyethylenimine）轉(zhuǎn)染試劑
1ml
10ml
50ml
100ml
粉末非即用型
Seebio
Seebio?線性聚乙烯亞胺，MW40000
10mg
100mg
1g
Seebio
Seebio?線性聚乙烯亞胺， MW25000
1g
相關(guān)產(chǎn)品
平衡鹽及抗生素
品牌
貨號(hào)
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
Seebio
Hanks平衡鹽粉劑(1×HBSS,含酚紅)
1L
Seebio
PBS緩沖液
500ml
WAKO
293-72601
D-PBS(-),Powder
1L×10
299-72603
10L
WAKO
Penicillin-Streptomycin Solution（×100）
青霉素-鏈霉素溶液（×100）
100mL
WAKO
Penicillin-Streptomycin Solution（×50）
青霉素-鏈霉素溶液（×50）
100mL
Seebio 293細(xì)胞專用培養(yǎng)基
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
產(chǎn)品說明
規(guī)格
SeeHEK293CD01基礎(chǔ)培養(yǎng)基(液體)
(無動(dòng)物源，化學(xué)成分限定,不含水解物，含微量生長(zhǎng)因子)
1L
SeeHEK293CD01基礎(chǔ)培養(yǎng)基(干粉)
(無動(dòng)物源，化學(xué)成分限定,不含水解物，含微量生長(zhǎng)因子)
10L
100L
SeeHEK293CD02基礎(chǔ)培養(yǎng)基(液體)
(無動(dòng)物源，化學(xué)成分限定,不含水解物和生長(zhǎng)因子)
1L
SeeHEK293CD02基礎(chǔ)培養(yǎng)基(干粉)
(無動(dòng)物源，化學(xué)成分限定,不含水解物和生長(zhǎng)因子)
10L
100L
SeeHEK293CD03基礎(chǔ)培養(yǎng)基(液體)
原始培養(yǎng)基已經(jīng)含有4mM Gln
1L
SeeHEK293CD03,基礎(chǔ)培養(yǎng)基(干粉)
原始培養(yǎng)基已經(jīng)含有4mM Gln
10L
100L
SeeHEK293FM01補(bǔ)料培養(yǎng)基(液體)
液體補(bǔ)料A含有60g/L的葡萄糖，補(bǔ)料B不含葡萄糖
1L+100ml
SeeHEK293FM01補(bǔ)料培養(yǎng)基(干粉)
液體補(bǔ)料A含有60g/L的葡萄糖，補(bǔ)料B不含葡萄糖
10L+1L
100L+10L
Seebio? 條件培養(yǎng)液(293T)
含有細(xì)胞分泌物的培養(yǎng)液
10ml
250ml
WAKO BalanCD 無血清細(xì)胞培養(yǎng)基
  1. cGMP級(jí)別
  2. 可以提供液體及粉末形式
  3. 無血清
  4. 已取得DMF
  5. 化學(xué)成分限定
適應(yīng)小試劑放大
HEK293系列：基因治療病毒載體生產(chǎn)，蛋白瞬時(shí)表達(dá)·重組蛋白生產(chǎn)
貨號(hào)
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
91165-1L
BalanCD HEK293
BalanCD HEK293培養(yǎng)基
1L
94137-10L
10L
94137-100L
100L
91166-500ML
BalanCD HEK293 Feed
BalanCD HEK293補(bǔ)料
500mL
981444-10L
10L
981444-100L
100L
防止細(xì)胞結(jié)團(tuán)
品牌
貨號(hào)
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
WAKO

Sodium Dextran Sulfate 5,000
葡聚糖硫酸鈉鹽5,000（生化級(jí)）

25g
WAKO
100g
WAKO
500g
WAKO

Sodium Dextran Sulfate 5,000
葡聚糖硫酸鈉鹽5,000（分子級(jí)）

25g
WAKO
100g
WAKO
500g
消泡劑
品牌
貨號(hào)
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
WAKO

Antifoam SI
消泡劑 SI

100ml
WAKO
500ml
WAKO

Antifoam PE-H
消泡劑 PE-H (參考)在20℃時(shí)，粘度約983cP

100ml
WAKO
500ml
WAKO
Antifoam PE-M 消泡劑 PE-M (參考)在20℃時(shí)，粘度約325cP
100ml
WAKO
500ml
WAKO
Antifoam PE-L 消泡劑 PE-L (參考)在20℃時(shí)，粘度約160cP
100ml
WAKO
500ml
細(xì)胞解離
品牌
貨號(hào)
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
WAKO
203-20251

Trypsin-EDTA Solution without Phenol Red, AF
胰蛋白酶EDTA溶液（無酚紅）

100ml
WAKO
207-20271

Trypsin-EDTA Solution (High Trypsin) without Phenol Red, AF
胰蛋白酶EDTA溶液（無酚紅）

100ml
WAKO細(xì)胞凍存
BAMBANKER 無血清細(xì)胞凍存液 用戶文獻(xiàn)眾多
產(chǎn)品編號(hào)
英文名稱
應(yīng)用
規(guī)格
BAMBANKER'
常規(guī)工具細(xì)胞，干細(xì)胞，PBMCs,免疫細(xì)胞，類器官等
120mL
306-14684
20mL×5
PRIME-XV 無DMSO 凍存液 無動(dòng)物源成分，化學(xué)成分限定，已取得美國FDA DMF
產(chǎn)品編號(hào)
英文名稱
應(yīng)用
規(guī)格
91140-10ml
PRIME-XVFreezISDMSO free
干細(xì)胞
10mL
91140-100ml
100mL
iStock 無血清細(xì)胞凍存液 無異源，已取得日本《再生醫(yī)療等制品材料適格性確認(rèn)書》
產(chǎn)品編號(hào)
英文名稱
應(yīng)用
規(guī)格
385-19451
iStockXeno-Free Freezing medium
人免疫細(xì)胞，PBMCs,MSCs,iPS等
120mL