糖鏈抗原15-3(CA15-3)-磁微粒化學(xué)發(fā)光（吖啶酯）解決方案

專題推薦 | 2023-09-26

1.項(xiàng)目背景

糖鏈抗原15-3(CA15-3)是粘蛋白1（Mucin1或MUC1）經(jīng)水解后的一種可溶形式。

《乳腺癌診療指南（2022）》指出：CA15-3、癌胚抗原是乳腺癌中應(yīng)用價(jià)值較高的腫瘤標(biāo)志物，主要用于轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者的病程監(jiān)測(cè)。CA15-3和癌胚抗原聯(lián)合應(yīng)用可顯著提高檢測(cè)腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的敏感性。由于其對(duì)局部病變的敏感性低，且在某些良性疾病和其他器官的惡性腫瘤中也可升高，因此不適合用于乳腺癌的篩查和診斷。有研究表明，CA15-3項(xiàng)目可用于輔助II期和III期乳腺癌患者的監(jiān)控。對(duì)患者進(jìn)行連續(xù)檢測(cè)得到的CA15-3檢測(cè)值應(yīng)與其他臨床方法聯(lián)合用于監(jiān)控乳腺癌。

性能表現(xiàn)（化學(xué)發(fā)光（吖啶酯）平臺(tái)）

2.1 抗體配對(duì)組合：

糖鏈抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017I）包被羧基磁珠+糖鏈抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017J）標(biāo)記吖啶酯；

2.2 具體指標(biāo)

參考《YY/T 1176-2010 癌抗原CA15-3定量測(cè)定試劑（盒）（化學(xué)發(fā)光免疫分析法）》

a 最低檢出限：不高于1.0 U/mL。

用零濃度校準(zhǔn)品或樣本稀釋液作為樣本進(jìn)行檢測(cè)，重復(fù)測(cè)定20次，得出20次測(cè)量結(jié)果的RLU值(相對(duì)發(fā)光值)，計(jì)算其平均值(M)和標(biāo)準(zhǔn)差(sD)，得出M+2SD，根據(jù)零濃度校準(zhǔn)品和相鄰校準(zhǔn)品之間的濃度一RLU值結(jié)果進(jìn)行兩點(diǎn)回歸擬合得出一次方程，將M+2SD的RLU值帶入上述方程中，求出對(duì)應(yīng)的濃度值，即為最低檢測(cè)限。

CA15-3 最低檢出限
空白樣本（n=20）		發(fā)光值
1		697
2		726
3		638
4		668
5		677
6		639
7		638
8		683
9		715
10		689
11		693
12		713
13		676
14		635
15		723
16		693
17		697
18		625
19		748
20		680
Mean		683
SD		34
M+2SD		751
9.2 U/mL	1	17283
	2	18901
	3	18980
	Mean	18388
最低檢出限 U/mL		0.03

b 重復(fù)性：分別為1.9%及2.6%

用 30U/mL±6U/mL和 150U/mL±30U/mL的樣本各重復(fù)檢測(cè)10次，計(jì)算10次測(cè)量結(jié)果的平均值M和標(biāo)準(zhǔn)差SD，根據(jù)公式CV=SD/M*100％得出變異系數(shù)CV。其變異系數(shù)(CV)應(yīng)不大

于10％(儀器自動(dòng)操作法)或不大于15％(手工操作法)。

CA15-3 重復(fù)性
序號(hào)	發(fā)光值	濃度值U/mL	發(fā)光值	濃度值U/mL
1	52225	31.74	217968	162.60
2	50512	30.63	212318	157.25
3	49512	29.98	215140	159.91
4	50515	30.63	224639	169.02
5	51016	30.95	219351	163.92
6	50336	30.51	224923	169.29
7	49061	29.69	218999	163.59
8	50503	30.62	211526	156.51
9	49790	30.16	218945	163.53
10	50802	30.82	218211	162.83
M	50427	30.57	218202	162.85
SD	873	0.57	4443.91	4.24
CV	1.7%	1.9%	2.0%	2.6%

c 線性范圍： 1 U/mL- 至少200U/mL。

將接近線性范圍上限的高值樣本按一定比例稀釋為至少5種濃度，其中低值濃度的樣本須接近線性范圍的下限。按試劑(盒)說(shuō)明書進(jìn)行操作，每一濃度重復(fù)檢測(cè)2次，計(jì)算平均值，將結(jié)果平均值和稀釋比例用最小二乘法進(jìn)行直線擬合，并計(jì)算線性相關(guān)系數(shù)r。

線性范圍上限不應(yīng)低于參考值的5倍，下限應(yīng)低于參考值的1/5（參考羅氏CA19-9參考值為26.4 U/mL (第95百分位數(shù))、28.5 U/mL (第97.5百分位數(shù))、34.5 U/mL (第99百分位數(shù))）。在生產(chǎn)企業(yè)所規(guī)定的線性范圍內(nèi)，試劑(盒)的相關(guān)系數(shù)r應(yīng)≥0.99。

CA15-3 線性
線性	實(shí)測(cè)值均值U/mL	理論值U/mL
線性1	0.40	0.20
線性2	1.53	0.81
線性3	5.64	3.22
線性4	18.36	12.90
線性5	58.13	51.58
線性6	206.33	206.33
線性相關(guān)系數(shù)r		0.9994

d 回收率：88.5%。

將濃度約為200U/mL(允許偏差為±20％)的癌抗原CA15-3樣品(A)加入血清或其他相應(yīng)的基質(zhì)樣品B中，所加入A的體積宜不超過(guò)總體積（A+B）的10%。

回收率應(yīng)在(85％～115%)范圍內(nèi)。

序號(hào)	混合樣本U/mL	低值樣本U/mL	高值樣本U/mL
1	25.60	11.93	166.37
2	25.08	11.60	175.66
3	25.92	11.90	162.97
均值	25.53	11.81	168.33
回收率	88.5%

3.臨床相關(guān)性（化學(xué)發(fā)光（吖啶酯）平臺(tái)）

西寶生物發(fā)光平臺(tái)CA15-3抗體配對(duì)與Roche CA15-3試劑賦值的臨床樣本（高值部分）相關(guān)性R2>0.94，相關(guān)性良好；低值部分（≤60 U/mL）相關(guān)性R2>0.90，相關(guān)性同樣較好。

4.測(cè)試方案

特別注明：

1）若客戶采用吖啶酯體系，建議CA15-3抗體與吖啶酯的標(biāo)記摩爾比在1:4左右；

2）若客戶采用堿性磷酸酶或辣根過(guò)氧化物酶體系，建議優(yōu)化酶與抗體標(biāo)記的摩爾比例。

待測(cè)樣本:預(yù)稀釋樣本加樣量20ul；采用合適的稀釋液將樣本稀釋10倍；

試劑1：糖鏈抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017I）-磁珠稀釋物，用量50ul/測(cè)試；

試劑2：糖鏈抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017J）-吖啶酯稀釋物，用量50ul/測(cè)試；

反應(yīng)條件：

第一步：20ul預(yù)稀釋樣本（10倍稀釋）+50ul試劑1混合，37℃孵育9min，清洗；

第二步：加入50ul試劑2混合，37℃孵育9min，清洗；

第三步：加入預(yù)激發(fā)液及激發(fā)液，進(jìn)行測(cè)試。

測(cè)試使用發(fā)光儀器:科斯邁SMART 500S；可適用于各類吖啶酯體系的化學(xué)發(fā)光儀器（如四川邁克、深圳亞輝龍、山東康華生物、基蛋生物、南京諾爾曼等）

5.產(chǎn)品信息(可提供大包裝試劑)

產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	推薦配對(duì)
糖鏈抗原CA15-3單克隆抗體	EKY0017I	糖鏈抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017I）包被羧基磁珠+糖鏈抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017J）標(biāo)記吖啶酯（抗體配對(duì)組合）
糖鏈抗原CA15-3單克隆抗體	EKY0017J
糖鏈抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017I）-羧基磁珠濃縮液	DKY1319A
糖鏈抗原CA15-3單克隆抗體（貨號(hào)：EKY0017J）-吖啶酯濃縮液	DKY1319B
羧基磁珠(超順磁)，1um	DEG0091B-1-100mg
羧基磁珠(超順磁)，3um	DEG0091A-3-100mg